Introducción
La hemoglobina es una proteína propia de los glóbulos rojos que se encarga de capturar el oxígeno y dióxido de carbono. Ademas de indirectamente proporcionar su típico color rojo al eritrocito. Se estima que en cada eritrocito hay entre 250 a 300 millones de moléculas de hemoglobina
También se encarga de mantener el equilibrio acido-base de pH (7.4). Con ayuda de los anhídridos carbónicos cataliza la conversión rápida de CO2 y y H20 a bicarbonatos y asi mantener el equilibrio acido base.
Es capaz de capturar moléculas de oxigeno a través de grupos de hierro (Fe) los cuales se encuentran acompañando a las cadenas hemo; asi, el eritrocito puede trasportar dichas moléculas por todo el torrente sanguíneo. Otra manera de ver a la hemoglobina es de la manera bioquímica en la que la molécula se forma por dos cadenas beta y dos alfa.
La importancia de esta prueba es que permite dar un indicio de enfermedades de la sangre como la anemia
Fundamento
Se hace uso de un reactivo llamado Drabkin el cual esta constituido de cianuro de potasio (KCN), ferrocianuro de potasio (K3Fe(CN)6), fosfato ácido de potasio (KH2PO4), además de detergentes como el tritón X-100, el nonidex y el sterox
Los detergentes se encargaran de degradar la membrana (fosfolípida) de la célula para que la hemoglobina pueda ser liberada
Posteriormente el ferrocianuro de potasio convertirá el hierro del tipo ferroso presente en la hemoglobina a hierro de tipo férrico para conseguir metahemoglobina
El cianuro de potasio se combina con la metahemoglobina para forma cianometahemoglobina el cual es un compuesto colorido adecuado para absorción al fotómetro.
Por último el fosfato ácido de potasio contribuye a la regulación de pH del medio
Método: Colorimétrico
Material
- Sangre con EDTA
- Tubos de ensaye
- Fotómetro
- Pipetas de Sahli
- Reactivo de Drabkin
- Pipeta de Sahli
- Pipeta volumétrica
- Propipeta
Reactivos
| Drabkin | Ferrocianuro de potasio 0.60 mmol/L Cianuro de potasio 77 mmol/L Fosfato ácido de potasio 2 mmol/L |
Longitud de onda: 546 nm
Procedimiento
Método 1
- En un tubo agregar 5mL de solución de Drabkin
- Añadir 0,02 μL de sangre con ayuda de la pipeta de Sahli
- Mezclar por inversión y esperar por 10 minutos
- Leer el blanco, es decir el reactivo de Drabkin solo
- Leer la muestra preparada
| Blanco | Estándar | Muestra | |
| Reactivo (mL) | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
| Estándar (μL) | -- | 20 | -- |
| Muestra (μL) | -- | -- | 20 |
Método 2
- Rotular cuatro tubos con los números 1, 2 , 3 y 4
- Rotular un quinto tubo como blanco, en este poner solamente 5 ml de reactivo de Drabkin
- Depositar en el tubo 1, 3mL de reactivo y agregar 1 mL de estándar de hemoglobina
- Al tubo 2, poner 2mL de reactivo y 2 de estándar
- Al tubo 3, 1mL de reactivo y 3L de estándar
- Al cuarto tubo solo se le agregan 5 mL de estandar
| Blanco | Estándar 1 | Estándar 2 | Estándar 3 | Estándar 4 | |
| Reactivo (mL) | 5.0 | 3.0 | 2.0 | 1.0 | -- |
| Estándar (mL) | -- | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 5.0 |
Cálculos
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Valores de Referencia
Hombres:15.5 - 18.0 g/dL
Mujeres: 12.5 - 15.0 g/dL
Bibliografía
S.A (Abril 2018) Hemoglobina. Spinreact. https://www.spinreact.com/files/Inserts/Bioquimica/BSIS20_HEMO_2018.pdf