Recuento de Plaquetas (Método Directo)

 

Introducción

Es la cuantificación de plaquetas existentes por cada mm3  a partir de un conteo en la cámara de Neubauer

Fundamento

La sangre se diluye con Solución Brecher-Cronkite para posteriormente ser colocado en una cámara de Neubauer, ahí se contarán las células presentes en los 5 cuadros medianos del cuadrante central


Muestra

Sangre anticoagulada con EDTA


Material

  • Pipeta de Thoma
  • Tubo de goma con boquilla
  • Cámara de recuento Neubauer
  • Cubreobjetos especial
  • Microscopio
  • Caja Petri

Reactivo
  • Brecher-Cronkite (Oxalato de amonio al 1%) o Rees Ecker (azul de cresilo)
  • Colorante Wright
  • Buffer
  • Aceite de Inmersión

Procedimiento
  1. Depositar en un tubo  2 a 3 mL de solución de oxalato de amonio al 1%
  2. Colocar el tubo de goma en la entrada superior de la pipeta de Thoma
  3. Aspirar la solución de oxalato de amonio hasta la marca 0.5 (si sobrepasa esta graduación tomar un pedazo de papel o algodón y colocando en la puta para que absorba el sobrado)
  4. Aspirar la sangre obtenida con EDTA hasta la marca 1 de la pipeta de Thoma
  5. Limpiar la pipeta por fuera con un papel
  6. Volver a aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11
  7. Quitar el tubo de goma y tapar los extremos con papel parafil
  8. Mezclar por 30 seg a mano
  9. Colocar la pipeta en el agitador por 2 a 3 minutos
  10. Retirar el papel y desechar la primeras 3 o 4 gotas de la pipeta
  11. Limpiar la punta de papel absorbente
  12. Posicionar el cubreobjetos en la cámara de Neubauer
  13. Depositar la siguiente gota entre el cubreobjetos y la cámara dejando que esta se absorba y distribuya por capilaridad. 
  14. La pipeta debe estar colocada en posición casi vertical
  15. Dejar reposar la sangre durante 20 minutos en ambiente húmedo colocándolo en una caja Petri con un papel o algodón húmedo
  16. Colocar la cámara de Neubauer en el microscopio
  17. Contar los eritrocitos de los 4 cuadrantes medianos y el central de la cuadricula central, tal y como señala la imagen con las áreas coloreadas de rojo

Es importante que para evitar confusiones, por ello, se hace el conteo solo dentro de la zona del cuadrado y en cuanto a los hematíes que se encuentran en las líneas solo se consideran los que están el borde superior y derecho
Forma correcta de contar los eritrocitos, contando solo las
células del  interior y del borde superior e izquierdo (lineas
verdes) de un cuadrado pequeño. En este ejemplo los
 de color rojo son los que se toman en cuenta


Los cuadrados pequeños se deben observar en zic zac


Cálculos
Una vez contados los 5 cuadrados medianos de la cámaras se debe realizar el siguiente calculo:


Formula 1
  1. Sumamos las plaquetas de los 5 cuadros medianos
  2. El resultado de la suma se multiplica por el factor de dilución (puede ser 10 o 20) 
  3. Se multiplica por la inversa de la altura (10)
  4. Por último se divide entre el área de  cada 1 de los cuadros medianos (0.2 mm)
  5. El objetivo de tenerlo a la inversa a la altura  es que indirectamente se multiplique con el área (Geometría: altura x área = mm3)
Formula 2
  1. Sumamos las plaquetas de los 5 cuadros medianos
  2. El resultado de la suma se multiplica por el factor de dilución (puede ser 10 o 20) 
  3. Se multiplica por la inversa de la altura (10)
  4. Multiplicamos por el total de cuadros pequeños que hay en la cuadricula central (400)
  5. Por último se divide entre los cuadros pequeños que contamos realmente en los 5 cuadros medianos (80)
  6. El objetivo de tenerlo a la inversa a la altura  es que indirectamente se multiplique con el área (Geometría: altura x área = mm3)
Valores de Referencia

150,000-450,000 plaquetas por mm3



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