Tinción Hematoxilina-Eosina

 

La tinción hematoxilina eosina o H-E es una técnica del tipo ácido base, la cual consiste en que sobre un tejido se aplica Hematoxilina la cual teñirá de morado a toda estructura que sea de carga negativa (como los nucleos), para posteriormente añadir un tinte que sirva de contraste como la Eosina que teñirá de rosa toda estructura de carga positiva como es el citoplasma de las células

Materiales

• Cajas Petri
• Goteros
• Cajas Coplin

Reactivos

• Xilol
• Alcohol Absoluto-Xilol
• Alcohol Absoluto
• Alcohol del 96°
• Alcohol del 70°
• Hematoxilina de Harris
• Eosina
• Hidróxido de amonio
• Agua destilada
• Alcohol ácido

Preparación de hidróxido de amonio

1. En una caja Petri poner agua destilada hasta la mitad
2. Posteriormente agregar 9 gotas de hidróxido de amonio

Procedimiento

1. Poner la muestra ubicada en un portaobjeto  s en un frasco con xilol por 5 minutos
2. Tras esos 5 minutos retirar y poner el portaobjetos en alcohol absoluto con xilol por 5 minutos
3. Pasar y lavar en alcohol absoluto por 5 minutos
4. Lavar en alcohol de 96° por otros 5 minutos
5. Lavar con alcohol de 70° por 5 minutos
6. Hidratar con agua destilada durante por 5 minutos
7. Secar la preparación
8. Teñir con hematoxilina de Harris, dejando reposar con la hematoxilina por 3 a 5 minutos
9. Virar en agua destilada hasta que se aprecie un color azul-morado
10. Pasar a alcohol ácido hasta notar un cambio de coloración
11. Volver a lavar en agua
12. Diferenciar sumergiendo durante unos segundos en agua amoniacal (hidróxido de amonio)
13. Lavar en agua
14. Volver a secar la preparación
15. Teñir con eosina reposando por 30 segundos
16. Inclinar la muestra y con un gotero dejar gotear sobre este, alcohol del 96°, 2 veces
17. De igual manera gotear sobre la muestra alcohol absoluto por otras 2 veces o lavados
18. Lavar 2 veces con alcohol absoluto- xilol haciendo un lavado cada 1 minutos
19. Dejar en xilol por 5 a 10 minutos
20. Colocar el cubreobjetos