Introducción
El colesterol es un lípido el cual parece una sustancia cerosa que se encuentra en todas las células del cuerpo. El hígado es capaz de formar el colesterol que el cuerpo necesita y asi poder ser precursor de hormonas (testosterona, estrógeno y progesterona), impulsor de la vitamina D, es fundamental en la estructura de las membranas celulares del cuerpo y suministra energía a los músculos.
El colesterol es posible encontrarlo de dos manera, de manera libre y unido a ácidos grasos de cadena larga como los éster de colesterol (forma que se usa para su almacenamiento en el cuerpo), estos últimos se usan para la cuantificación de colesterol en el suero
Lipoproteínas
El colesterol por sus propiedades, es una sustancia hidrofóbica por lo que no es posible disolverse en el suero, es por eso que se une a las lipoproteínas, unas macromoléculas encargadas de transportar lípidos como el colesterol y los triglicéridos, estas moléculas transportaran estos lípidos desde su origen hasta donde serán almacenados o consumidos
Las lipoproteínas están hechas de apolipoproteínas, un componente proteico que junto a los fosfolípidos y el colesterol libre conformarán la capa que rodea al núcleo en donde se encontrarán a los esteres de colesterol y/o triglicéridos. A partir de la unión de apolipoproteínas y lípidos es que se obtendrán diferentes tipos de lipoproteínas (VHDL, HDL, LDL, quilomicrón). Distintas combinaciones de lípidos y de proteínas dan a lugar a lipoproteínas de diferente densidad.
Cuando un órgano se encuentra carente de componente lipídico, las lipoproteínas transportan hacia el lugar los lípidos
El colesterol es transportado principalmente por las lipoproteínas HDL (colesterol bueno) y LDL (colesterol malo)
LDL
Transporta el colesterol a las membranas celulares que lo usaran para su estructura membrática,
Se le llama colesterol malo debido a que si este llega a niveles excesivos las células no lo absorberán en su totalidad y terminara adhiriéndose a las paredes arteriales dando pie a la ateroesclerosis y a otros problemas cardiovasculares.
HDL
El colesterol bueno es una sustancia orgánica de alta densidad por su alto contenido de proteínas, transporta el colesterol desde los tejidos al hígado para su eliminación.
Patologías
La arterioesclerosis es la acumulación de colesterol alrededor de las paredes de las venas, es la causa de muerte mas alta en los Estados Unidos
Fundamento
Para su determinación, nos basamos en la reacción de Libermman-buchard, en la que se utiliza una mezcla acida en anhídrido acético que producirá una coloración verde, aunque también es posible determinar por métodos enzimáticos
El colesterol esterasa (CHE) se usara como catalizador de los esteres de colesterol dando como resultado colesterol libre y ácidos grasos, posteriormente se realizará una oxidación enzimática mediante la colesterol oxidasa (CHOD) formara H2O2 y colesterina, El H2O2 se unirá a fenol y 4-aminotrasferasa, que en presencia de peroxidasa (POD) formará quinona con una coloración
La coloración es proporcional a la concentración de colesterol en la muestra
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Material
- Fotómetro
- Centrífuga
- Tubos de ensayo
- Cronómetro
- Reactivos
Reactivos
| Reactivo 1 | Pipes pH 6.9 90mmol/L Fenol 26mmol/L |
| Reactivo 2 | Peroxidasa 1250 U/L Colesterol esteresa 300 U/L Colesterol oxidasa 300 U/L 4-aminofenazona 0.4 mmol/dL |
| Estándar | Solución de colesterol 200mg/dL |
Lectura
Leer a 505 nm (500-550) la D.O. de la muestra y el estandar
Temperatura
37ºC /15-25ºC
Procedimiento
Técnica
| Blanco | Estándar | Muestra | |
| Estándar | ----- | 10µL | ----- |
| Muestra | ----- | ----- | 10µL |
| Reactivo | 1.0mL | 1.0mL | 1.0mL |
- Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C o 10 minutos a temperatura ambiente
- Ajustar el aparato a cero con el blanco de reactivo o con agua destilada
- Leer al espectrofotómetro la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
Cálculos
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Factor de conversión: mg/dL x 0.0258 = mmol/L
Valores de referencia y de riesgo
<200 mg/dL Normal
200-239 mg/dL Moderado
>240 mg/dL Alto
Interferencias
No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y bilirrubina hasta 10 mg/dL. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación del Colesterol
Bibliografía
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