Cuantificación de Triglicéridos Séricos

Materiales

  • Espectrofotómetro
  • Centrifugadora
  • Muestra problema
  • Reactivos
  • Micropipeta
  • Tubos de ensaye


 Introducción


Los triglicéridos son el principal tipo de grasas (lípidos) que transporta el organismo, a travez de la sangre. Se les llama triglicéridos debido a la estructura química que presentan, pues estan constituidos por glicerina condensada en tres ácidos grasos. La glicerina o glicerol tiene 2 grupos -OH, en los cuales unirán los 3 ácidos grasos. Es por ello que también se le identifica por las siglas TAG

Son proveniente de alimentos tales como la mantequilla, aceite y otras grasas que se consumen constantemente. Aunque también el hígado es capaz de crearlos  e incluso cambiarlos a colesterol.

Cuando comemos el cuerpo digiere las calorías y grasas de los alimentos, y empezará a liberar triglicéridos a la sangre, esto con el propósito de aportar energía a todo el cuerpo, aunque, si el cuerpo no los requiere, serán almacenados como grasa corporal. Los triglicéridos se pueden unir a proteínas y colesterol que estarán en la sangre,  y tendrá como resultado la formación de lipoproteínas que serán de alta y baja densidad.

En el caso del hígado tomara las grasas  de los alimentos y los unirá con proteínas y colesterol, lo que formara lipoproteínas de muy baja densidad que serán transportadas por todo el torrente sanguíneo

Si una persona presentase niveles altos de triglicéridos pero no de colesterol, no se tomara como un factor de riesgo del tipo cardiaco, pero si puede estar relacionado a problemas pancreáticos o diabetes


Quilomicrones y VLDL

Son las lipoproteinas encargadas del transporte de triglicéridos desde el hígado, a órganos como los músculos, el corazón y el tejido adiposo

Sin embargo los quilomicrones son creados en el intestino a diferencia de las VLDL que son sintetizadas por el hígado


Causas de niveles altos de triglicéridos

  • Enfermedades: Diabetes, hipotiroidismo, enfermedades renales y hepáticas
  • Herencia
  • Aumento de peso
  • Consumos excesivo de calorías
  • Medicamento: Esteroides, diuréticos y anticonceptivos


 Método

Enzimatico Colorimétrico GPO-POD

Fundamento

Los triglicéridos incubados  en lipoproteinas (LPL) liberan glicerol y ácidos grasos libres

El glicerol es fosforilado por el glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP, en presencia de glicerol quinasa (GK), para producir  glicerol-3-fosfato (G3P), y adenosiba-5-difosfato (ADP). 

El G3P es convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP), y peroxido de hidrogeno (H2O2), reaccionará con el 4-aminofenazona (4-AF) y p-clorofenol, esta reacción será catalizada por la peroxidasa (POD) que dará una coloración roja

Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos Grasos Libres

Glicerol + ATPG3P + ADP

G3P + O2DAP + H2O2

H2O2+ 4-AF + p-ClorofenolQuinona + H2O


La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la muestra


Reactivos

RT 1

Solución Reguladora

  • GOOD pH 7.5: 50 mmol/L
  • p-clorofenol: 2mmol/L


RT 2

Enzimas

  • Lipoproteina Lipasa: 150,000 U/L
  • Glicerol Quinasa: 500 U/L
  • Glicerol-3-Oxidasa: 2,500 U/L
  • Peroxidasa: 440 U/L
  • 4-Aminofenazona: 0.1 mmol/L
  • ATP: 0.1 mmol/L


Estándar Primario de Triglicéridos: 200 mg/dL


  • Disolver el contenido en un vial de R2 Enzimas en un frasco de R1 Amortiguador. 
  • Reconstruir en un vial de R2 Enzimas en 10 mL de R1 Amortiguador
  • Tapar y mezclar suavemente hasta disolver el contenido

Estabilidad

6 semanas en nevera (2-8°C) o una semana de 15-25°C


Ayuno

12 horas recomendablemente


Muestra

Suero o Plasma Heparinizado o con EDTA


Técnica

     Blanco         Estándar
o Patrón       		Muestra        
Estándar     -----10µL-----
Muestra----------10µL
Reactivo1.0mL1.0mL1.0mL

Longitud de onda: 505 nm (490-550 nm)

Temperatura: 37°C o a 15-25°C

Ajustar el equipo a 0, frente al Blanco

Blanco: Agua destilada


  1. Mezclar e Incubar 5 minutos a 37°C o si se prefiere 10 min a temperatura ambiente
  2. Leer la absorbancia frente al blanco de reactivos del patrón y la muestra
  3. Calcular la concentración de la muestra

Cálculos

mg/dL de los triglilicéridos= x 2000 (Conc. del Estándar)

Conversion: mg/dL x 0.0113 = mmol/L


Valores de Referencia

Hombres: 40-160 mg/dL

Mujeres: 35-135 mg/dL


Bibliografía

Triglicéridos: ¿por qué son importantes? (2022, septiembre 3). Mayo Clinic. https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/high-blood-cholesterol/in-depth/triglycerides/art-20048186

¿Qué son los triglicéridos? (2021, abril 26). Fundación MAPFRE. https://www.fundacionmapfre.org/educacion-divulgacion/salud-bienestar/habitos-saludables/alimentacion/que-son-trigliceridos/

De triglicéridos, D. C. (s/f). GPO-POD. Enzimático colorimétrico. Spinreact.com. Recuperado el 10 de abril de 2023, de https://www.spinreact.com/files/Inserts/Bioquimica/BSIS31_TG_2018.pdf

Triglicéridos. (s/f). StudySmarter ES. Recuperado el 10 de abril de 2023, de https://www.studysmarter.es/resumenes/biologia/base-molecular-y-fisicoquimica-de-la-vida/trigliceridos/

Carvajal, C. (2014). Lipoproteínas: metabolismo y lipoproteínas aterogénicas. Medicina legal de Costa Rica, 31(2), 88–94. https://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1409-00152014000200010

¿Qué son los triglicéridos? (s/f). Riojasalud.es. Recuperado el 13 de mayo de 2023, de https://www.riojasalud.es/servicios/medicina-interna/articulos/que-son-los-trigliceridos