Introducción
La urea es una sustancia orgánica toxica, producto final de la degradación de proteínas.
Primero las proteínas se descomponen en aminoácidos que posteriormente serán catabolizados en amoniaco, la cual es tóxica para el organismo, es por eso que el hígado se encargará de convertirlo a urea (este ultimo paso, es el ciclo de la urea) que se enviará a los riñones para ser excretada por la orina.
Asimismo la urea también es un Nitrógeno No Proteico (NNP), es decir es un componente que conforma al factor Nitrógeno No proteico, un grupo de compuestos nitrogenados que no son proteínas, aunque, la mayoría de estos (compuestos) son provenientes del catabolismos de proteínas y ácidos nucleicos. La urea representa el 45% de NNP en suero (El ácido ureico y la creatinina también son parte de estos NNP)
Su cuantificación es importante para saber el estado del hígado (perfil hepático) y el riñón.
Para esta prueba podemos optar entre el método enzimático o colorimétrico
Pruebas Colorimétrica
Para esta prueba se puede optar entre el método o cinético o de punto final los cuales aunque tienen el mismo fundamento y valores de referencia, varia un poco su forma de realizarse, además de sus cálculos correspondientes
Fundamento
La urea reaccionará con con el o-oftalaldehido en un medio ácido que dará un complejo coloreado
Reactivos
| REACTIVO 1 | o-oftalaldehido | 4.8 mmol/L |
| REACTIVO 2 | Solución Borato Ácido sulfúrico | 87 mmol/L 3 mol/L |
| Estándar | Patrón primario acuoso de Urea | 50 mg/dL |
Materiales
- Micropipetas
- Espectrofotómetro
- Centrifugadora
- Tubos de ensayo
Muestra: Suero o plasma heparinizado
Longitud de onda: 510 nm (500-550)
Temperatura: 37°C
a) Forma Cinética
Procedimiento
1- Esperar y centrifugar de 1500 a 3500 rpm por 10 minutos
2- Pipetear en 3 tubos;
| Blanco | Estándar | Muestra | |
| Reactivo 1 | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |
| Estándar | ----- | 50 µL | ----- |
| Muestra | ----- | ----- | 50 µL |
3- Mezclar e incubar 1 min y añadir
| Reactivo 2 | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |
4- Mezclar e incubar a 37°C, leer la absorbancia al primer minuto y a los 2 minutos
5- Calcular el incremento de la absorbancia
Cálculos
b) Forma de Punto final
Procedimiento
| Blanco | Estándar | Muestra | |
| Reactivo 1 | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |
| Estándar | ----- | 25 µL | ----- |
| Muestra | ----- | ----- | 25 µL |
3- Mezclar e incubar 1 min y añadir
| Reactivo 2 | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |
Cálculo
Factor de conversión: mg/dL x 0.1665 = mmol/L.
Valores de referencia
15 a 45 mg/dL (2,49-7,49 mmol/L)
Enzimático
Fundamento
La ureasa cataliza la hidrolisis de la urea, de manera que se obtiene Amoniaco (NH3) y anhidrido carbónico (CO2)
Luego ese amoniaco se unirá al α-cetoglutarato gracias a la intervención del glutamato deshidrogenasa (GLDH) para conseguir L-glutamato; además de que el NADH se oxidará convirtiéndose en NAD+.
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Reactivos
| REACTIVO 1 Tampón | Tris pH 7.8 α-Cetoglutarato | 80 mmol/L 6 mmol/L |
| REACTIVO 2 Enzimas | Ureasa Glutamato Deshidrogenasa (GLDH) NADH | 3750 U/L 6000 U/L 0.32 mmol /L |
| Estándar | Patrón primario acuoso de Urea | 50 mg/dL |
- Micropipeta
- Tubos de ensayo
- Espectrofotómetro
- Centrifugadora
| Blanco | Estándar | Muestra | |
| Reactivo | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |
| Estándar | ----- | 10 µL | ----- |
| Muestra | ----- | ----- | 10 µL |
