El método fotométrico es el mas usado en cuanto métodos cuantitativos.
La radiación es una forma de energía que puede ser descrita
en términos que sugieren 2 modelos.
El efecto fotoeléctrico que indica que la radiación está compuesta
de partículas llamadas fotones, lo que indica que la radiación se comporta como
partícula y como onda electromagnética
El espectro electromagnético es una enorme gamma de energía
que se desplaza a través del espacio por medio de ondas electromagnéticas. Estas
radiaciones son parecidas excepto por su frecuencia y longitud de onda, asi
como en su manifestación
Las unidades de Longitud de onda son el nanómetro (ubicación rayos UV), el micrómetro y el Angstrom
Ley de Lambert-Beer
Es una ley que explica la relación entre la absorbancia de
luz y la concentración de una sustancia. La absorbancia es directamente
proporcional a la concentración.
Esta ley permite
determinar la concentración de una muestra desconocida en correlación de
estándares de concentración conocidas
La transmitancia es la inversa de la concentración.
Si la muestra estará dentro del rango UV se requiere del uso de celdas de cuarzo, pues
en celdas de cristal, los rayos UV no pasan
¿Cómo se usa el espectrofotómetro?
- Encender el espectrofotómetro
- Introducir la fecha
- Presionar el comando F4
- Volver a presionar F4
- Introducir el código o número de prueba
- El equipo realizara autocero con ayuda de agua destilada
- Colocar una muestra en un tubo de ensaye y posicionarlo de manera que la sonda del espectro quede hasta el fondo
- Presionar Enter para aceptar el valor de autocero
- Verificar la temperatura
- Colocar el blanco (puede ser agua o el reactivo para la determinación)
- El equipo preguntara si desea calibrar o no, si se va a realizar una curva de calibración, le pondremos que no, para asi anotar los estándares y graficar
- Introducir el ID del paciente
- Introducir los estándares en el equipo, limpiando entre cada muestra, de la menor a la mayor concentración
- Introducir la muestra problema
- Esperar que de el D.O. (Densidad Óptica)
- Presionar Enter
- Salir presionando ESC, se pedirá un lavado el cual se hará con agua destilada
- Purgar las tuberías y apagar el equipo