Introducción
También conocida como Creatin-Fosfoquinasa, es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo humano. Su función fisiológica esta asociada con la adenosina trifosfato (ATP) producida cuando el músculo se contrae. Cataliza la producción de fosfocreatina por medio de la fosforilación de una molécula de creatinina y para ello requiere del consumos de partículas ATP
Se encuentra principalmente en el musculo esquelético y el miocardio
Importancia Clínica
La creatin Kinasa es capaz de medir la actividad muscular,, puyes cuando un musculo se sobre-esfuerza fuera de su nivel, esta (CK) tiende a elevarse. Por lo cual la vuelve una indicadora indirecta de problemas
El nivel de CK en suero esta elevado en pacientes con alteraciones del músculo esquelético y en infartos de miocardio
Fundamento
La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa (HK) y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH):
La velocidad de formación de NADPH, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada
Método
NAC. Cinético UV
Reactivos
| R1 Tampón | Imidazol pH 7,0 100 mmol/L
Glucosa 20 mmol/L Acetato de magnesio 10 mmol/L EDTA 2 mmol/L |
| R2 Substrato |
ADP 2 mmol/L
AMP 5 mmol/L di-Adenosina-5- pentafosfato 10 mmol/L NADP+ 2 mmol/L Hexoquinasa (HK) 2500 U/L Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH) 1500 U/L N-acetilcisteína 20 mmol/L Fosfato de creatina 30 mmol/L |
Material
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. - Baño termoestable a 25ºC, 30ºC ó 37º C (± 0,1ºC). - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS Suero o plasma1 . Estabilidad: 7 días a 2-8ºC, protegida de la luz. La actividad de la creatin quinasa disminuye un 10% tras 1 día a 2-5ºC ó tras 1 hora a 15-25ªC.
Procedimiento
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . .25ºC / 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
| 25-30ºC | 37ºC | |
| RT (mL) | 1.0 | 1.0 |
| Muestra (µL) | 40 | 20 |
4. Mezclar, incubar 2 minutos.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (∆A/min).
Cálculos
25º- 30ºC ∆A / min x 4127 = U/L CK
37ºC ∆A / min x 8095 = U/L CK
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L). Factores de conversión de temperaturas Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por: Temperatura Factor para convertir a de medición 25ºC 30ºC 37ºC
| 25°C | 30°C | 37°C | |
| 25ºC 30ºC 37ºC | 1.00 0.64 0.41 | 1.56 1.00 0.63 | 2.44 1.56 1.00 |
Valores de referencia
| 25°C | 30°C | 37°C | |
| Hombres, hasta | 80 U/L | 130 U/L | 195 U/L |
| Mujeres, hasta | 70 U/L | 110 U/L | 170 U/L |
Cinético, N., Adp, F., & Atp, C. (s/f). NAC. Cinético UV. Com.mx. Recuperado el 11 de mayo de 2023, de https://www.spinreact.com.mx/public/lineas/CK.pdf
Creatina cinasa. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 12 de mayo de 2023, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/creatina-cinasa/
Creatina Quinasa. (s/f). Grupo Sobre Entrenamiento (G-SE). Recuperado el 12 de mayo de 2023, de https://g-se.com/creatina-quinasa-bp-L57cfb26e738d2