Cuantificación de Glucosa Sérica

Materiales:

  • Espectrofotómetro
  • Tubos de Ensaye
  • Micropipeta
  • Reactivos de Trabajo

Introducción

La glucosa es el principal alimento de las células. Son absorbidas principalmente en forma de polisacáridos como lo son el almidón y el glucógeno; o en disacáridos como la sacarosa, lactosa y la maltosa. Estas sustancias son degradadas parcialmente por la amilasa salival y por la hidrolisis acida estomacal. 

Los oligosacáridos liberados son hidrolizados por las amilasas pancreáticas y los disacáridos intestinales en monosacáridos, de los cuales el principal es la glucosa. 

La absorción de la glucosa a nivel del tubo digestivo se lleva a cabo por un mecanismo de transporte  activo; una vez en circulación por el sistema circulatorio(sanguíneo, linfático), intestinal y tisular.

A nivel del hígado y los músculos, la glucosa es almacenada como glucógeno, un polisacárido de almacenaje. La glucosa circulante es captada por las células de los diferentes órganos y se usa como principal sustrato energético, a este proceso se le llama glucolisis. Si el cuerpo requiere una necesidad anormal de energía, empieza la movilización de glucógeno (glucogenólisis) y una biosíntesis de glucosa (neoglucogenólisis). 

Importancia Clínica

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células y la insulina es la que facilita la entrada de glucosa en la sangre. La diabetes Mellitus es una enfermedad en la que se presenta una hiperglucemia debido al déficit de insulina.

El mantenimiento de la glucemia dentro de los valores normales, asegura  una aportación energética permanente  a las células del cuerpo humano.

Fundamento y Método

Para la cuantificación de glucosa se hace uso del método de Trinder el cual consiste...


GLUCOSA + CO2 + H2O2 H2O2  + GLUCONATO

2H2O2 + FENOL + 4-AFQUINONA + 4H2O

Simplificación e interpretacion

-Usando la Glucosa Oxidasa (GOD)como catalizador la glucosa  en contacto con el Dióxido de Carbono y el Agua Oxigenada, obtendremos Agua oxigenada más Gluconato.
-2 Particulas de Agua oxigeneda mas Fenol y 4-Aminotransferasa, junto con la catalización proporcionada por la Peroxidasa (POD) se obtendrá Quinona junto a 4 partículas de Agua

Observaciones
En algunas hojas de reacción (SPINREACT) menciona en la segunda reacción:
 1 Párticula de Agua Oxigenada + Fenol + Ampirona -----------> Quinona + H2O

Reactivos

R1
Fenol: 0.3mmol/L
Tris pH 7.5: 92mmol/L

R2
Glucosa Oxidasa: 15,000 U/L
Peroxidasa: 1,000 U/L
4-Aminotransferasa 2.6mmol/L

Solución Estandar
Glucosa: 100mmol/L

Estabilidad
Disolver el R2 en el R1. La sustancia es estable un mes de 2 a 8°C o bien 7 días a temperatura ambiente al abrigo del sol

Muestra
Suero, plasma o LCR (Líquido Cefalo Raquideo)
Glucosa estable 3 días de 2 a 8°C

Técnica
Longitud de onda................ 505nm
Temperatura........................30-37°C
Ajuste del blanco frente al blanco del RT (reactivo)

     Blanco         Estándar       Muestra        
Estándar     -----10µL-----
Muestra----------10µL
Reactivo1.0mL1.0mL1.0mL

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente

Coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente


Cálculos

mg/dL Glucosa =x Conc. Estándar


mg/dL x 0.0555 = mmol/L

Concentración del estándar: 100 mg/dL 


Valores de Referencia:

55-110 mg/dL

3.05-6.11 mmol/L


Notas

La hemolisis hasta 0.3 g/dL de hemoglobina no interviene


Bibliografía

-Spinreact (s/f). Determinación cuantitativa de glucosa. Com.mx. Recuperado el 9 de abril de 2023, de https://www.spinreact.com.mx/public/_pdf/1001190.pdf 

-Luis Rodríguez, A., Raúl, A., Gabriela, D., Leyva, V., Técnica, S., Dra, L., Irma, D., & Aburto López, A. (s/f). Módulos: La salud del hombre y su ambiente Crecimiento y desarrollo intrauterino Parto, puerperio y periodo perinatal Crecimiento y desarrollo extrauterino Componente Bioquímica SGC-FESZ-MC-ML01. Unam.mx. Recuperado el 9 de abril de 2023, de https://www.zaragoza.unam.mx/wp-content/Portal2015/Licenciaturas/medico/manuales/Manual_Bioquimica.pdf

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